First molecular detection and genotyping of Neospora caninum in naturally infected cattle and sheep in Palestine
Date
2024-05-05
Authors
Heba suleiman salem alfarajeen
هبة سليمان سالم الفراجين
Journal Title
Journal ISSN
Volume Title
Publisher
Al-Quds University
Abstract
Neosporosis has become one of the most common diseases causing abortion in dairy cattle globally. The clinical signs of Neospora caninum have been reported in sheep, goats, deer, and horses. Fetal abortion induced by N. caninum is a common reproductive problem that causes significant economic loss in cattle and sheep husbandry. This study aimed to detect and identify N. caninum in intermediate hosts such as cattle and sheep from Palestine using polymerase chain reaction (PCR) followed by DNA Sanger sequencing and to study the genetic diversity of the study samples, targeting the MS10 microsatellite, using phylogenetic analysis. A total of 124 brain tissue samples were collected from 106 (85%) cattle and 18 (15%) sheep from a slaughterhouse in Jericho-Palestine. The PCR technique was used to identify the Neospora DNA in the brain samples based on the Nc-5 gene. N. caninum was detected in the brain samples; out of 124 samples, 30 (24.19%) samples were positive for N. caninum. The frequency of N. caninum in cattle (25.47%) was higher than that of sheep (16.66%). The infection caused by N. caninum was confirmed by DNA Sanger sequencing of
( 13 ) random positive samples. BLAST analyses of the Nc-5 gene revealed more than 92% to 99% matching with N. caninum sequences available in GenBank. Microsatellite MS10 repeats were used to study the genetic diversity of the Palestinian isolates. The microsatellite genotyping was done by next-generation sequencing (NGS). It was applied to 30 positive samples, and successful results were achieved in 15 samples. Our study sequences displayed 100% similarity with N. caninum isolated from dogs in Liverpool and 99.34% similarity with N. caninum isolated from cattle in Japan. The phylogenetic analysis of 15 N. caninum samples from Palestine and 83 microsatellite (MS10) repeats obtained from different countries and different hosts showed that N. caninum isolates are genetically diverse and distributed into
v
two main clusters. Locally, the Palestinian isolates are distributed in two clusters and share the same repeats with samples from Asia and Europe. The present study provided the first estimate of the frequency of N. caninum in cattle and sheep from Palestine. Additionally, it was also the first time for the investigation of the phylogenetic analysis of N. caninum based on microsatellite markers.
أصبح مرض النيوسبوروسيس (Neosporosis ) أحد أكثر الأمراض شيوعًا التي تسبب الإجهاض في الأبقار على مستوى العالم. حيث تم الإبلاغ عن العلامات السريرية لنيوسبورا كانينوم في الأغنام والماعز والغزلان والخيول. ومن المشاكل الإنجابية الشائعة إجهاض الجنين الناجم عن نيوسبورا كانينوم الذي تسبب بخسارة اقتصادية كبيرة في تربية الماشية والأغنام. هدفت هذه الدراسة إلى الكشف وتشخيص نيوسبورا كانينوم في العوائل الوسيطة كالأبقار والأغنام من فلسطين باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) متبوعاً بتسلسل سانجر ودراسة التنوع الوراثي لعينات الدراسة باستخدام التحليل التطوري مستهدفاً الميكروساتليت ( (MS10. أجريت هذه الدراسة على 124 عينة تم جمعها من أنسجة الدماغ من 106 (85%) من الأبقار و 18 (15%) من الأغنام من مسلخ أريحا-فلسطين. ثم تم استخدام تقنية البوليميراز المتسلسل للتعرف على الحمض النووي لنيوسبورا كانينوم في عينات الدماغ بناءً على الجين .Nc-5 وجاءت نتائج هذه الدراسة كما يلي : من أصل 124 عينة، كانت 30 (24.19%) عينة إيجابية للنيوسبورا. واظهرت النتائج وجود مرض النيوسبوروسيس في الأبقار (25.47%) أعلى من الأغنام (16.66%). ثم تم تأكيد العدوى التي تسببها النيوسبورا من خلال تسلسل الحمض النووي لثلاثة عشر عينة إيجابية عشوائية، وكشفت النتائج لجين Nc-5 عن أكثر من 92% إلى 99% من التطابق مع تسلسلات النيوسبورا كانينوم المتوفرة في بنك الجينات. وتم استخدام المايكروساتليت لدراسة التنوع الوراثي في العزلات الفلسطينية بواسطة تقنية تسلسل الجيل القادم لدراسة تسلسل الحمض النووي (NGS). ومن ثم تم تطبيق التنميط الجيني للمايكروساتليت في 30 عينة إيجابية، وتم تحقيق نتيجة ناجحة في 15 عينة .أظهرت النتائج تشابهًا بنسبة 100% مع النيوسبورا كانينوم المعزولة من الكلاب في ليفربول وتشابهًا بنسبة 99.34% مع النيوسبورا كانينوم المعزولة من الماشية في اليابان. و أظهر التحليل التطوري لخمسة عشر عينة فلسطينية و 83 عينة من المايكروساتليت (MS10) التي تم الحصول عليها من بلدان مختلفة و مضيفين مختلفين أن عزلات النيوسبورا كانينوم متنوعة وراثيا وتتوزع عالميًا إلى مجموعتين رئيسيتين. محلياً، توزعت العزلات الفلسطينية في مجموعتين مع عينات من آسيا وأوروبا. قدمت الدراسة الحالية التقدير الأول لوجود النيوسبورا كانينوم في الأبقار والأغنام من فلسطين. بالإضافة إلى ذلك، كانت أيضًا المرة الأولى التي يتم فيها دراسة التحليل التطوري للنيوسبورا كانينوم بناء على المايكروساتليت.
أصبح مرض النيوسبوروسيس (Neosporosis ) أحد أكثر الأمراض شيوعًا التي تسبب الإجهاض في الأبقار على مستوى العالم. حيث تم الإبلاغ عن العلامات السريرية لنيوسبورا كانينوم في الأغنام والماعز والغزلان والخيول. ومن المشاكل الإنجابية الشائعة إجهاض الجنين الناجم عن نيوسبورا كانينوم الذي تسبب بخسارة اقتصادية كبيرة في تربية الماشية والأغنام. هدفت هذه الدراسة إلى الكشف وتشخيص نيوسبورا كانينوم في العوائل الوسيطة كالأبقار والأغنام من فلسطين باستخدام تفاعل البوليميراز المتسلسل (PCR) متبوعاً بتسلسل سانجر ودراسة التنوع الوراثي لعينات الدراسة باستخدام التحليل التطوري مستهدفاً الميكروساتليت ( (MS10. أجريت هذه الدراسة على 124 عينة تم جمعها من أنسجة الدماغ من 106 (85%) من الأبقار و 18 (15%) من الأغنام من مسلخ أريحا-فلسطين. ثم تم استخدام تقنية البوليميراز المتسلسل للتعرف على الحمض النووي لنيوسبورا كانينوم في عينات الدماغ بناءً على الجين .Nc-5 وجاءت نتائج هذه الدراسة كما يلي : من أصل 124 عينة، كانت 30 (24.19%) عينة إيجابية للنيوسبورا. واظهرت النتائج وجود مرض النيوسبوروسيس في الأبقار (25.47%) أعلى من الأغنام (16.66%). ثم تم تأكيد العدوى التي تسببها النيوسبورا من خلال تسلسل الحمض النووي لثلاثة عشر عينة إيجابية عشوائية، وكشفت النتائج لجين Nc-5 عن أكثر من 92% إلى 99% من التطابق مع تسلسلات النيوسبورا كانينوم المتوفرة في بنك الجينات. وتم استخدام المايكروساتليت لدراسة التنوع الوراثي في العزلات الفلسطينية بواسطة تقنية تسلسل الجيل القادم لدراسة تسلسل الحمض النووي (NGS). ومن ثم تم تطبيق التنميط الجيني للمايكروساتليت في 30 عينة إيجابية، وتم تحقيق نتيجة ناجحة في 15 عينة .أظهرت النتائج تشابهًا بنسبة 100% مع النيوسبورا كانينوم المعزولة من الكلاب في ليفربول وتشابهًا بنسبة 99.34% مع النيوسبورا كانينوم المعزولة من الماشية في اليابان. و أظهر التحليل التطوري لخمسة عشر عينة فلسطينية و 83 عينة من المايكروساتليت (MS10) التي تم الحصول عليها من بلدان مختلفة و مضيفين مختلفين أن عزلات النيوسبورا كانينوم متنوعة وراثيا وتتوزع عالميًا إلى مجموعتين رئيسيتين. محلياً، توزعت العزلات الفلسطينية في مجموعتين مع عينات من آسيا وأوروبا. قدمت الدراسة الحالية التقدير الأول لوجود النيوسبورا كانينوم في الأبقار والأغنام من فلسطين. بالإضافة إلى ذلك، كانت أيضًا المرة الأولى التي يتم فيها دراسة التحليل التطوري للنيوسبورا كانينوم بناء على المايكروساتليت.