Development of loop mediated isothermal DNA amplification (LAMP) test for the detection of active brucellosis infections among diary animals
| dc.contributor.author | Ahmad Msallam Ibrahim Makhamreh | en |
| dc.contributor.author | أحمد مسلم إبراهيم مخامره | ar |
| dc.date.accessioned | 2024-10-28T11:03:51Z | |
| dc.date.available | 2024-10-28T11:03:51Z | |
| dc.date.issued | 2021-05-29 | |
| dc.description.abstract | Brucellosis is zoonotic a disease caused by bacterial genus Brucella. It affects a wide range of mammalian species and is transmissible to humans, making it a major socioeconomic problem. Because of the unspecific symptoms and signs that are shared with other febrile diseases, diagnosing brucellosis can be challenging and due to the slow growth rate in blood culture. Rose Bengal test is an internationally recommended test for the screening of brucellosis. They are not always specific as the antibodies can cross-react with other gram-negative bacteria, these tests are not of high value in detecting infection at early stages, May give a false negative result, for a short period after infection, Low sensitivity particularly in long chronic cases, relatively low specificity in endemic areas, since generation and disappearance of antibodies requires some time. To diagnose brucellosis, we developed a LAMP assay. The reaction takes 60 minutes to complete at 63 ° C. Its highly sensitive method , simple, quick, specific, and cost-effective. The strand displacement reaction is carried out at a constant temperature and is characterized by the use of four different primers, each of which is designed to recognize six distinct regions on the target gene. There was no cross-reactivity with the other bacteria. Its More effective than traditional PCR (Less expensive, easier, faster, no hardware required, and with the same accuracy as PCR). The blood test was carried out for 5000 sheep. out of which 200 (4%) were positive. We used the positive results (200) samples and re-examination using the LAMP method that we have developed. Whereas, by developing the LAMP method, we were able to eliminate the interference with other bacteria, and get rid of the false positive result due to the presence of antibodies to Brucella in the blood as a result of a previous infection. Whereas, The LAMP method, unlike the serology approach, is based on the detection of DNA for bacteria rather than antibodies to the bacterium, In addition to removing all of the barriers to detecting brucellosis that existed using serological approaches. | en |
| dc.description.abstract | الحمى المالطية : هي عبارة عن مرض ناتج عن الإصابة ببكتيريا تسمى البروسيلا ، تصيب الكثير من الثديات وخاصة الأغنام وا لأبقار. كما أنها تنتقل إلى ا لإنسان عن طريق العدوى من تلك الحيوانات، تؤدي إلى حدوث اجهاض متكرر وضعف عام عند الحيوانات التي تصيبها، كما أنها تسبب صداعا حادا وارتفاعا بدرجات الحرارة خاصة في الليل وضعفا عاما عند إصابة ا لإنسان . الطريقة الشائع ة للكشف عن بكتيريا البروسي لا هي الطرق السيرولوجية مثل فح ص Rose-Bengal او فحص ال ELISA ، حيث إن هذه الطرق تعتمد على الكشف عن وجود ا لأجسام المضادة لهذه البكتيريا، وأن ا لأجسام المضادة للبكتيريا تبقى مدة طويلة داخل الجسم بعد الشفاء من الإصابة، ووجود ا لأجسام المضادة للبروسيلا داخل الجسم لا يعني أن الإصابة حالية. كما أن نتيجة هذا الفحص تتداخل مع الكثير من أنواع البكتيريا الأخرى المشابهة للبروسيلا . لقد قمنا بتطوير طريقة ذات دقة عالية وبفعالية تفوق جميع الطرق المعتمدة للكشف عن البروسيلا ذات مزايا ممتازة، و خطوات بسيط ة سهلة ، بالإضافة إلى التكلفة المادية القليلة نسبيا وعدم حاجتها لأدوات معقدة، تدعى هذه الطريقة Loop Mediated Isothermal Amplification) (. إنها تعتمد في كشفها عن البكتيريا على ال DNA لهذه البكتيريا وهذا ما يمنحها الدقة العالية ، وعدم تداخل نتيجة هذا الفحص مع الأنواع الأخرى من البكتيريا المشابهة للبروسيلا. وتحت اج إلى أربع ة من Primer تربط على ستة مواقع مختلفة على سلسلة ال DNA , لا تحتاج إلى درجات حرارة مختلفة كتلك المستخدم ة في تقنية ال PCR ، حيث إن الكثير من الميزات لتقنية ال LAMP تمنحها التفوق أيضا على تقنية ال PCR التي تحتاج إلى أجهزة ثمينة معقدة ووقت طويل . قمنا بعمل هذه الدراسة باستخدام 5000 عينة مأخوذة من الأغنام والماعز، كما ان هناك عدد قليل من عينات الابقار والجمال ضمن هذه العينات من مناطق مختلفة من فلسطين ، حيث تم فحص تلك ال عينات بشكل أولي من خلال فحص Rose-Bengal , كانت عدد النتائج الإيجابية للبروسيلا تساوي 200 عينة )كانت نسبة الإصابة تعادل 4%(. حيث قمنا بإعادة فحص العينات الإيجابية باستخدام تقنية ال LAMP التي قمنا بتطويرها بالشكل الذي يتناسب مع ال DNA للبروسيلا واستبعاد جميع أنواع البكتيريا الأخرى التي من الممكن ان تتداخل مع البروسيلا. بينت النتائج التي حصلنا عليها الدقة العالية لفحص LAMP مقارنة مع فحص الروز بنجال بالاعتماد على تقنية ال PCR في مقارنة النتائج. حيث انها تماثل تقنية ال PCR من ناحية دقة النتائج وتتفوق عليها من ناحية سهولة الاستخدام ,اقل تكلفة وعدم حاجتها الى أجهزة . | ar |
| dc.identifier.uri | https://dspace.alquds.edu/handle/20.500.12213/9464 | |
| dc.language.iso | en_US | |
| dc.publisher | Al-Quds University | en |
| dc.title | Development of loop mediated isothermal DNA amplification (LAMP) test for the detection of active brucellosis infections among diary animals | en |
| dc.title | تطوير تقنية ال LAMP للكشف عن بكتيريا البروسيلا النشطة في الحيوانات المنتجة للحليب | ar |
| dc.type | Thesis |