Cloning and Expression of SARS CoV-2 Surface Protein and its Use in Serological Tests
| creativework.keywords | Cloning , Expression ,SARS ,Serological Tests | en |
| dc.contributor.author | Hana Ghalib Sabri Alkhatib | en |
| dc.contributor.author | هناء غالب صبري الخطيب | ar |
| dc.date.accessioned | 2023-01-16T13:06:34Z | |
| dc.date.available | 2023-01-16T13:06:34Z | |
| dc.date.issued | 2022-05-28 | |
| dc.description.abstract | مقدمة: يعتبر فايروس كورونا المسبب الرئيسي لمرض التنفس الحاد كورونا 2019، الذي غزا العالم في غضون اشهر قليلة، وسبب عدد اصابات و وفيات عالي جدا، و أثر على العالم اجمع بشكل سلبي. الفحوصات المصلية مهمة جدا لتشخيص المرضى المصابين بهذا المرض، والحاملين له من غير أي أعراض بهدف الكشف عنهم و الحد من انتشار المرض بشكل أوسع، بالاضافة لعمل فحوصات تبين قوة و نوع المناعة التي يحفزها جسم الانسان لمحاربة هذا النوع من الفايروسات، و عليه الهدف الاساسي من هذه الدراسة هو تطوير الفحص المناعي المرتبط بالانزيم (الاليزا) للكشف عن وجود أجسام مضادة الناتجة عن الأصابة بفايروس كورونا 2019 المسبب لهذا المرض. طرق البحث: تم تصميم وتأسيس اختبار مصلي بطريقة الاليزا للكشف عن الأجسام المضادة ضد فايروس كورونا 2019 وذلك من خلال استنساخ جين البروتين الخارجي المدبب للفايروس واضافته للمادة الوراثية الخاصة في البكتيريا بهدف ترجم الجين الى لبروتين و الحصول عليه واستخدامه في الكشف عن الاجسام المضادة في الاليزا المطورة، بحيث تم فحص المناعة الجسدية لكل من مرضى مصابين حاليا او سابقا او حاصلين على تطعيم الكورونا. النتائج: أظهرت نتائج الفحص المطوّر لقياس المناعة حساسيّة الكشف عن الأجسام المضادّة بتراكيز منخفضة دليل على نجاح الفحص المناعي المطوّر من خلال استنساخ البروتين الشوكي لفايروس كورونا 2019 ، بالاضافة الى التمييز بين نسختين مختلفتين من البروتين الشوكي حسب القطع الجينيّة المستنسخة، بحيث تبين أن المستنسخ رقم 8 يعطي حساسية أكبر وأفضل من مستنسخ رقم 105 في الكشف عن المناعة ضد الفايروس. الاستنتاج: كان لدى الفحص المطوّر حساسية عالية وقدرة على تحديد كميّة و نوعيّة للأجسام المضادّة لفايروس كورونا 2019 بتراكيز منخفضة ويعتبر هذا الاختبار طريقة لقياس مناعة السكّان ويمكن استخدامه لاجراء دراسات وبائيّة مستقبلية. | ar |
| dc.identifier.uri | https://dspace.alquds.edu/handle/20.500.12213/7602 | |
| dc.language.iso | en_US | |
| dc.publisher | Al-Quds University | en |
| dc.title | Cloning and Expression of SARS CoV-2 Surface Protein and its Use in Serological Tests | en |
| dc.title | استنساخ البروتين السطحي لـ SARS CoV2 والتعبير عنه واستخدامه في الاختبارات المصلية | ar |
| dc.type | Thesis | |
| dcterms.abstract | Background: SARS-CoV-2 (severe acute respiratory syndrome coronavirus 2) is a novel coronavirus that has recently arisen and is causing a human pandemic, despite the fact that molecular diagnostic techniques have been rapidly developed. For contact tracing, detecting the viral reservoir, and epidemiologic investigations, validated serologic assays are required. The main objective of our study was to develop indirect ELISA in based cloning of spike protein to have a cheap protein source and available in our hands to measure immunity qualitative and quantitative using the ELISA. Methods: We tried different procedures in cloning spike protein in this study and were successful in cloning two different gene segments of the surface protein, one of 700 bp and the other of 500 bp, which we named clone 8 and clone 105, respectively. The antigen was expressed from these clones in Bl21 E. coli bacteria, and we tested samples from: current, previous infection, vaccinated and non-vaccinated patients using the amplified expressed proteins in ELISA. Result: we found out that the examined samples responded to each clone with varying degrees of sensitivity. Taking the status of the samples into account, we attempted to validate which clone is better than the other, and the data revealed that most samples had greater antibody titers with clone 8. IgG and IgM testing. Conclusion: Protein expressed by Clone 8 is likely more sensitive to be used in ELISA setting for detection of SARS CoV-2 infection than protein that was expressed in clone 105. Clone 8 was found to have a higher similarity (99% resemblance) to the SARS CoV2 surface protein upon BLAST analysis. Its worth to do more evaluation study for this expressed protein in term of to study further; its sensitivity and specificity in SARS CoV-2 epidemiological surveys, like using control samples with known titers or like compare our results with commercial kits results. We recommend that this clone be utilized for large-scale screening of covid19 in any future outbreak in our nation; nevertheless, it requires greater sensitivity and specificity validation. | en |